骨切片（DT-1BON1000-96）

【預期用途】

用于傳統(tǒng)染色法和培養(yǎng)基ELISA（CrossLaps）骨破壞重吸收的體外精確檢測

【產(chǎn)品簡介】

       骨是一種很有活力的組織，在人的一生中都在不斷地重建?，F(xiàn)已證實，在骨中存在一些特殊物質，能夠影響到破骨細胞的活性。因此我們使用高質骨而不是牙質應用于研究?，F(xiàn)在將向我們的客戶提供此類服務。

每批骨切片通過重吸收檢測法來測試其質量。在該檢測中，由骨切片上產(chǎn)生凹點證明破骨能力。隨后用培養(yǎng)基酶免吸附試劑盒Crosslaps檢測上清液。只有當兩項測試都呈陽性時，該骨切片才能用于進一步的重吸收檢測。

       破骨細胞產(chǎn)生凹點的活性通過人破骨重吸收方法檢測。對破骨重吸收的定量分析可以采用傳統(tǒng)的對凹點染色方法，亦可使用培養(yǎng)基酶免吸附檢測法Crosslaps。由于破骨細胞實驗往往需要較大量的蛋白質，而從牛骨切片中提取的蛋白質用于96孔板。

       將人破骨細胞分散覆蓋于牛骨皮質片上，然后加入不同濃度的抗重吸收劑（A: 90 μM, B: 30 μM, C: 10 μM, D: 0 μM）。第6天取等量細胞培養(yǎng)上清液用于檢測膠原c端交聯(lián)肽（ctx）的量（培養(yǎng)基ELISA-CrossLaps）,從骨片上轉移破骨細胞并且用阻凝蛋白蘇木精染色，形成可見的凹點。

       我們正使用這種6孔板大骨片（GBS）來提取破骨細胞蛋白，這些破骨細胞在骨上而非塑料上培養(yǎng)，對蛋白質的表達是有影響的（數(shù)據(jù)未列出）。要進行破骨細胞的基因描述實驗時，我們推薦使用這些底物提取RNA。從骨切片分離RNA的方案和人破骨細胞的培養(yǎng)方案可根據(jù)要求制定。

【來源】

骨切片由牛股骨的皮質部分制成，適合96孔板，直徑6mm，大概200μm厚。

【儲存】

骨切片保存于4°C下70%乙醇中。為了保持骨切片的質量，應縮短使用周期和避免室溫下放置。

【處理】

我們推薦在轉移至96孔板之前，先將骨切片置于含培養(yǎng)基的10%血清中清洗三次。

【培養(yǎng)】

重吸收實驗一般持續(xù)72小時。然而在加入試劑到破骨細胞培養(yǎng)液中16或24小時后，就可觀察到細微的變化了，甚至8小時后即可用相應方法觀察到。

【特征】

與凹點染色和劃線不同，培養(yǎng)基酶免吸附法Crosslaps不要求破骨細胞培養(yǎng)的終止。因此，可以從相同的股切片中獲得幾個樣品，從而使互換性檢測特定物質影響下的破骨細胞活性成為可能。材料的處置與常見細胞培養(yǎng)物的處置相同。

【參考文獻】

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      6.       STROUP ET AL. J BONE MINER RES 16:1739-1746 (2001).

骨切片

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